Беседуя с Videogames Daily, помощник продюсера Assassin’s Creed: Brotherhood Жан‑Франсуа Боивин (Jean‑Francois Boivin) сказал, что в новой части приключений Десмонда Майлса (Desmond Miles) не будет возможности кооперативного прохождения. Сделать это крайне сложно, ведь разработчикам пришлось бы нарушить сюжетную линию и добавить в Assassin’s Creed: Brotherhood еще одного героя. Такое решение может повлечь за собой множество сюжетных неувязок.
В проекте Assassin’s Creed: Brotherhood Десмонд снова вернется в Италию эпохи Возрождения. Здесь он поможет своему предку Эцио вернуть славу древнему ордену и навсегда изгнать тамплиеров из Рима. Молодые убийцы будут уязвимыми в бою, так что протагонисту лучше сопровождать их на заданиях. Игрок сможет посылать своих подопечных на миссии в Германию, Испанию и Англию.